ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2257—2012 芒果细菌性黑斑病原菌 分子检测技术规范 Molecular detection for pathogen of mango bacterial black spot disease 行业标准信息服务平台 2013-03-01实施 2012-12-07发布 中华人民共和国农业部 发布 NY/T2257—2012 #言 前 本标准按照GB/T1.1给出的规则起草。 本标准由农业部农垦局提出。 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口。 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：蒲金基、漆艳香、谢艺贤、张欣、张贺、陆英、张辉强。 行业标准信息服务平台 I NY/T2257—2012 芒果细菌性黑斑病原菌分子检测技术规范 1范围 本标准规定了芒果细菌性黑斑病原菌［Xanthomonascampestrispy.mangiferaeindicae（Patel， Moniz&Kulkami)Robbs，Ribeiro&Kimura分子检测方法。 本标准适用于芒果树叶片、枝条、果柄和果实上细菌性黑斑病原菌的定性检测。 2规范性引用文件 件。凡是不注日期的引 用文件其最新版本（包括所 本文件 SN/T1193 HING ON 3术语和定义 下列术语和定义 文件 3. 1 S 芒果细菌性黑斑病 mango bacterial black spotdisease 菌性角 又称芒果 斑病·由蓝黑腐黄单 胞杆闲艺 果效病变利 monas campestris dicate (Patel.Mon &kuikamiRobbRibu Kimura pv.mangife 种心 为害芒果的检 原菌的分类地位、寄主范围，地理分布及其为害症 疫性细菌病害 A.6、A.7和 A.8. 3.2 致病性基因 HrpB 在子 物 HrpB基 兰氏阴性植物病原细菌中决定 病性和诱导非寄主 因 病原细 最性反 及抗病植物产 3.3 R 聚合酶链式反 ton,PeR 高变性成为单链工 成聚合酶作用和适宜的反应 模板基因序列先 下，根据模板序列设 板DNA两条链上相应的 一段互补序列发生退 火而互 计的两条引物分别与 合，接着在DNA聚合 酶的作用下以四种脱氧核糖核酸（dNTP为底物使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这 一循环，使欲扩增的基因片 段以几何倍数护 4原理 根据芒果细菌性黑斑病原菌过敏性反应和致 法因HrpB序列特有碱基信息设计特异性引物， 对待检样品进行PCR扩增。依据是否扩增获得预期321bp的DNA片段，判断样品中是否携带芒果细 信息服务平台 菌性黑斑病原菌。 5仪器设备及试剂 见B.1、B.2。 6取样 按附录A描述的症状仔细检查芒果树叶片、枝条、果柄和果实，发现芒果细菌性黑斑病疑似症状， 1