ICS 65.020 CCS B 16 湖 DB43 南 省 地 方 标 准 DB43/T 1 9 70—2020 摇蚊实验室饲养技术规程 Guideline for Laboratory feeding technology of Chironomidae 2020-12-29发布 湖南省市场监督管理局 2021-03-29实施 发 布 DB43/T 1970—2020 目 次 前言························································································································ Ⅲ 1 范围 ····················································································································· 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 3 术语和定义 ············································································································ 1 4 环境条件 ··············································································································· 1 5 培养基 ·················································································································· 2 6 饲养装置 ··············································································································· 2 7 饲养方法 ··············································································································· 2 8 饲养记录 ··············································································································· 3 附录 A（资料性） Elendt M4 培养基配方 ···································································· 4 附录 B（资料性） 水中饱和溶解氧计算方法 ···································································· 5 附录 C（资料性） 摇蚊发育不同时期的特征 ···································································· 7 I DB43/T 1970—2020 II DB43/T 1970—2020 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020 给出的规则起草。 本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的起草和发布单位不承担相关责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化委员会归口。 本文件起草单位：湖南省植物保护研究所，长沙艾格里生物科技有限公司。 本文件主要起草人：刘勇、陈昂、张德咏、张战泓、蒋桂芳、罗杰、罗香文、陈武瑛、熊浩。 III DB43/T 1970—2020 IV DB43/T 1970—2020 摇蚊实验室饲养技术规程 1 范围 本文件规定了摇蚊实验室饲养及繁殖的环境条件、培养基、饲养装置、饲养方法等技术要求。 本文件适用于湖南省摇蚊的实验室饲养与繁殖。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 卵 摇蚊成虫产的受精卵。 3.2 卵块 摇蚊产出的卵团，由卵螺旋规则排列形成的胶质圆柱块体。 3.3 蛹 从幼虫变态发育成成虫的过渡形态的摇蚊。 3.4 成虫 完成变态发育、已羽化、性成熟的摇蚊。 4 环境条件 4.1 光照 光照/黑暗时间为 14 h/10 h，光照强度 800 Lux -1300 Lux。 4.2 温度 摇蚊饲养与孵化的水温控制在 20 ℃-25 ℃。 4.3 湿度 1 DB43/T 1970—2020 湿度保持在 60％以上。 5 培养基 使用存放并曝气处理 24 h 以上的曝气水或人工培养基（M4，配方见附录 A），培养水 pH 值为 6.5～ 8.0，溶解氧含量不低于空气饱和值（附录 B）的 60％，水质硬度（以 CaCO3 计）范围为 10 mg/L ～ 250 mg/L。 6 饲养装置 6.1 组成 摇蚊饲养装置由养虫笼、培养容器、喂食盘、照明系统、曝气系统组成。养虫室应密闭，避免外界 阳光、蚊虫、天敌进入，并配备加湿器、空调、温湿度计、照度计等。 6.2 养虫笼 可拆式养虫笼，尺寸为 50 cm×50 cm×50 cm，铝合金管可拆卸框架，80 目涤纶透明纱网笼子，一 面具拱形拉链门及袖筒式小门。 6.3 培养容器 直径 180 mm 的结晶皿，皿内平铺一层约 3 cm 厚的粗石英砂（粒径 5 mm） ，加入培养水至结晶皿上 缘。结晶皿上应有标示卡，记录该摇蚊的中文名、拉丁名、卵产出的日期等信息。 6.4 喂食盘 直径为 90 mm 的培养皿，往培养皿中放置沾满蔗糖水的脱脂棉团，用于饲喂成虫。 6.5 照明系统 由时控开关、灯管组构成，控制光暗周期及光照强度。 6.6 充气系统 由超静气泵以及导管、一次性塑料滴管构成，能在饲养期间持续往培养水中温和曝气。 7 饲养方法 7.1 卵 用一次性塑料滴管吸取摇蚊卵或用镊子夹住卵块柄状端，转移至结晶皿中静置培养，受精卵即开始 发育。 7.2 幼虫 7.2.1 一般 2 天左右，受精卵就能发育成幼虫，但初孵化出的幼虫仍旧被卵块中的胶状物黏结成团， 需要一段时间，幼虫才能完全分散，自由游动、觅食。幼虫期需分三次投入鱼饲料粉末（如 Tetramin） ， 投饵量为 0.2 1 mg/天/虫。饲喂量应严格监控，充分满足需求的同时亦不宜过多，以免污染水质，影 2 DB43/T 1970—2020 响其生长。 7.2.2 饲养期间，如果培养液浑浊，可以用虹吸法吸出浑浊的培养液，再加入新鲜的培养液。开始出 现摇蚊蛹时，就需要将结晶皿转移至养虫笼中。 7.3 蛹 摇蚊蛹栖息在水层，蛹期不足 1d 即能羽化成成虫。摇蚊蛹期仍旧能够游动、取食，需每天投喂鱼 饲料粉末，投饵量为 0.2 1 mg/天/虫。 7.4 成虫 7.4.1 成虫期间，笼具中置一培养皿，培养皿中放入一团沾有 2％蔗糖水的脱脂棉，供成虫取食。 7.4.2 摇蚊成虫寿命约 4 天，多数在羽化后的第一天婚飞、交配。每天在笼具内放置装有新鲜培养水 的结晶皿供摇蚊产卵，即能获得摇蚊卵。获得后再转移培养，回至 7.1 再开始培养。 8 饲养记录 饲养期间的环境条件记录、喂食量、产卵量、产出时间等数据需详细记录。 3 DB43/T 1970—2020 附 录 A （资料性） Elendt M4 培养基配方 A.1 Elendt M4 培养基配方 Elendt M4 培养基组分应符合表 A.1 的要求。 表 A.1 Elendt M4 培养基组分 储备液 浓度[mg/L] 加到 10 L 培养基中的量（mL） 1 氯化钙溶液 CaCl2 • 2 H2O 73 450 40 2 硫酸镁溶液 MgSO4• 7 H2O 123 300 10 3 碳酸氢钠溶液 NaHCO3 64 800 10 4 氯化钾溶液 KCl 5 800 10 MnCl2 • 4 H2O 3 605 LiCl 3 060 RbCl 710 SrCl2 • 6 H2O 1 520 CuCl2 • 6 H2O 168 ZnCl2 130 CoCl2 • 6 H2O 100 NaNO3 548 H3BO3 5 719 NaBr 320 Na2MoO4 • 2 H2O 126 KI 6.5 Na2SeO3 4.38 NH4VO3 1.15 Na2 SiO3 • 9 H2O 50 000 Na2EDTA • 2 H2O 5 000 FeSO4 • 7 H2O 1 991 KH2PO4 286 K2HPO4 368 Thiamindi hydrochlorid（VB1） 750 Cyanocobalamin （VB12） 10 Biotin（VH） 7.5 5 6 阳离子溶液 阴离子溶液 7 硅酸盐溶液 8 铁-EDTA 溶液 9 磷酸盐溶液 10 4 化合物 维生素溶液 1 2 2 5 5 1 DB43/T 1970—2020 附 录 B （资料性） 水中饱和溶解氧计算方法 B.1 计算公式 不同大气压和不同水温下饱和溶解氧（DO，mg/L）的计算公式如下：  477.8 D0   po T  32.26 式中： ρ ——当地实测大气压，hPa； po——标准大气压，hPa； T —