ICS号： 中国标准文献分类号 ： 团 体 标 准 发 布 实 施 发 布 ⡟⢋䓝䄲䇻㛋䊣㦶䊻㩰⼄㬱㬱⧂チⰞ⹽㏎㈷⭨エ᷍⭨エ⼦7)  ; 766)6 Ⱊ䐧㠘䐱䮲䫫⭥⥃Ⰹ⧍ⷀ㾈䄛㼁㩌㠸⪏㑋䐫㠸ⳉ 'HWHUPLQDWLRQRISXULQHVLQEHDQSURGXFWV8OWUDSHUIRUPDQFHOLTXLG FKURPDWRJUDSK\WDQGHPPDVVVSHFWURPHWU\   㩰⼄㬱㬔㠘䁈。 全国团体标准信息平台 I前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件的某些内容可能涉及专利。 本文件由上海市食品学会提出、归口并组织实施。 本文件起草单位：上海清美绿色食品（集团）有限公司、上海海洋大学、上海天计标准技术服务有 限公司、上海清美食品有限公司、上海天智绿色食品有限公司、上海天信绿色食品有限公司、上海天恩 绿色食品有限公司、上海清美农业科技有限公司、上海市清美现代农业产业研究院、上海天宣农业科技 有限公司。 本文件主要起草人：李立、赵勇、沈沪铭、刘海泉、马新新、杨露露、欧杰、葛春妹、陈婷、杜龙、 赵振阳、付行、杨丽。 声明：本文件的知识产权归属于上海市食品学会，未经上海市食品学会同意，不得印刷、销售。任 何组织、个人使用本标准开展认证、检验等活动应经上海市食品学会批准授权。本文件的发布机构不承 担识别专利的责任。 本文件首批承诺执行单位：上海清美绿色食品（集团）有限公司、上海海洋大学、上海天计标准技 术服务有限公司、上海清美食品有限公司、上海天智绿色食品有限公司、上海天信绿色食品有限公司、 上海天恩绿色食品有限公司、上海清美农业科技有限公司、上海市清美现代农业产业研究院、上海天宣 农业科技有限公司、上海理工大学、上海应用技术大学。T/SSFS0007-2023 全国团体标准信息平台 1豆制品中嘌呤的测定 超高效液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了超高效液相色谱-串联质谱法测定腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤的方法原理、 试剂和材料、仪器设备、样品制备与保存、测定、结果计算、检出限、定量限和精密度。 本文件适用于以大豆或杂豆为主要原料，经加工制成的发酵豆制品和非发酵豆制品中基于四种嘌呤 含量（包括腺嘌呤、鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤）的嘌呤测定。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和用水方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4方法原理 用甲酸和三氟乙酸混合溶剂水解提取豆制品中的四种嘌呤，经100℃水浴，冷却，离心取上清液， 旋蒸至干，乙腈水溶液复溶，经高速离心后过滤膜，用超高效液相色谱串联质谱测定，外标法定量。 5试剂和材料 水为GB/T6682规定的一级水。 试剂 5.1.1乙腈（C2H3N）：色谱纯。 5.1.2甲酸（CH2O2）：色谱纯。 5.1.3三氟乙酸（C2HO2F3）：色谱纯。 5.1.4氨水（NH3·H2O）：优级纯。 标准品 5.2.1腺嘌呤（C5H5N5）：纯度≥99%。 5.2.2鸟嘌呤（C5H5N5O）：纯度≥99%。 5.2.3黄嘌呤（C5H4N4O2）：纯度≥99%。 5.2.4次黄嘌呤（C5H4N4O）：纯度≥99%。 材料 聚四氟乙烯滤膜：孔径0.22µm，直径13mm，有机相。 溶液的配制 5.4.1乙腈水溶液（900mL/L）T/SSFS0007-2023 全国团体标准信息平台 2量取900.0mL乙腈（5.1.1）和100.0mL水充分混匀。 5.4.2标准储备溶液（200mg/L） 准确称取腺嘌呤（5.2.1）、鸟嘌呤（5.2.2）、黄嘌呤（5.2.3）、次黄嘌呤（5.2.4）各0.01g （精确至0.01mg），用20.0mL水初步溶解，于25℃下超声助溶，其中鸟嘌呤溶液分三次加入6.0mL 氨水（5.1.4）助溶，腺嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤溶液各加入200.0µL氨水（5.1.4）助溶，用水分别 稀释并用容量瓶定容至50.0mL，于0℃～4℃保存。其中腺嘌呤标准储备溶液的保质期为2天，鸟嘌呤 标准储备溶液的保质期为4天，黄嘌呤标准储备溶液现配现用，次黄嘌呤标准储备溶液的保质期为2天。 5.4.3混合标准工作溶液 用移液枪分别移取0.5µL、2.5µL、5.0µL、12.5µL、25.0µL、40.0µL、50.0µL的腺嘌呤、 鸟嘌呤、黄嘌呤和次黄嘌呤标准储备溶液（5.4.2）于15mL离心管中，加入2.5mL甲酸（5.1.2）和5.0 mL三氟乙酸（5.1.3），涡旋混匀后置入100℃水浴15min，取出立即冰浴30min，12000r/min离心10 min，取清液，于60℃旋转蒸发仪浓缩至近干，准确加入10.0mL乙腈水溶液（5.4.1）复溶，超声助 溶，12000r/min离心10min，取上清液经聚四氟乙烯滤膜（5.3）过滤，得到一系列混合标准工作液（质 量浓度分别为10µg/L、50µg/L、100µg/L、250µg/L、500µg/L、800µg/L和1000µg/L），待测。 6仪器设备 超高效液相色谱仪-串联三重四级杆质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。 电子天平：感量0.001g和0.01mg。 离心机：≥12000r/min。 恒温水浴锅：控温精度±2℃。 超声波清洗器。 组织捣碎机。 粉碎机。 涡旋混合器。 旋转蒸发仪。 7样品制备与保存 固体样品：取有代表性的样品用四分法缩分出至少100.0g，用粉碎机粉碎均匀后充分混匀备用， 粉碎过程中避免样品过热。分取两份试样，装入清洁容器内，密封并标记。一份为检样，一份为留样， 于0℃～4℃保存。 半固体样品：取有代表性的样品用四分法缩分出至少100.0g，用组织捣碎机充分捣碎，混匀备 用，分取两份试样，装入清洁容器内，密封并标记。一份为检样，一份为留样，于0℃～4℃保存。 液体样品：将样品充分混匀均质后，采用虹吸法按上、中、下三层取出至少100.0mL，充分混合 后，分取两份试样，装入清洁容器内，密封并标记。一份为检样，一份为留样，于0℃～4℃保存。 8测定 样品前处理 准确称量0.5g～2g样品（精确至0.001g）置于50mL离心管中，加入2.5mL甲酸（5.1.2）和5.0 mL三氟乙酸（5.1.3），涡旋混匀后置入100℃水浴15min，取出立即冰浴30min，12000r/min离心10 min。若无沉淀产生，取清液收集于250mL茄形瓶中，于60℃旋转蒸发仪浓缩至近干；若有沉淀产生， 取清液收集于250mL茄形瓶中，在样品残渣中再加入2.5mL甲酸和5.0mL三氟乙酸，重复上述操作，合 并酸水解提取液，于60℃旋转蒸发仪浓缩至近干。准确加入10.0mL乙腈水溶液（5.4.1）复溶，超声 助溶，12000r/min离心10min，取上清液1.0mL，准确加入9.0mL乙腈水溶液（5.4.1）混匀，经聚四 氟乙烯滤膜（5.3）过滤，液相色谱-串联质谱测定。根据需要可进行稀释。T/SSFS0007-2023 全国团体标准信息平台 3 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a)色谱柱：HILIC色谱柱（2.1mm×100mm，粒径1.9µm），或相当者； b)流速：0.30mL/min； c)流动相：乙腈：水=90：10（v/v）； d)柱温：30℃； e)进样量：2µL。 质谱参考条件 质谱参考条件如下： a)离子化模式：电喷雾电离（ESI）； b)扫描方式：多反应监测（MRM）； c)分辨率：单位质量分辨率； d)其他质谱条件参见附录A。 定性测定 取样品溶液与混合标准工作溶液在相同实验条件下测定，样液中待测物质的保留时间与标准工作溶 液中对应的标准物质保留时间偏差在±2.5％之内；在试样谱图中所选择的待测物离子对均出现且相对 丰度与标准工作溶液中定性离子的相对丰度允许偏差不超过表1规定的范围，即可确定为样液中存在相 应的目标化合物。 表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度比（%） 允许的最大偏差（%） ＞50 ±20 20～50 ±25 10～50 ±30 ≤10 ±50 定量测试 采用外标校准曲线法定量测定，标准曲线应至少保证5个浓度点。 取样品溶液与混合标准工作溶液在相同实验条件下测定，按浓度由低到高进样检测，以定量子离子 峰面积-浓度绘制标准工作曲线。待测样液中待测分析物的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性 范围则应稀释后测定。 空白试验 除不加试样外，均按上述步骤进行。 9结果计算 样品中各嘌呤含量以质量分数表示，按式