ICS 67.040 B 16 江 DB36 西 省 地 方 标 准 DB36/T 1527—2021 常见作物寄生线虫形态学鉴定方法 Morphological identification methods of parasitic nematodes in common crops 2021 - 12 - 14 发布 江西省市场监督管理局 2022 - 06 - 01 实施 发 布 DB36/T 1527—2021 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 主要设备 .......................................................................... 1 5 样品采集与分离 .................................................................... 1 6 鉴定方法 .......................................................................... 2 7 结果判定 .......................................................................... 2 附录 A（资料性）20 属常见作物寄生线虫的主要寄主、常见种及为害症状 ..................... 3 附录 B（规范性）20 属常见作物寄生线虫形态学特征 ....................................... 7 附录 C（资料性）19 属常见作物寄生线虫形态特征图 ...................................... 11 I DB36/T 1527—2021 前 言 本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由江西省农业农村厅提出并归口。 本文件起草单位：江西省农业科学院农业应用微生物研究所、吉安市农业科学研究所、吉安市永丰 县蔬菜产业发展中心、吉安市泰和县塘洲镇人民政府。 本文件主要起草人：范琳娟、徐雪亮、刘子荣、喻吉生、涂年生、康宏波、胡平华、姚英娟。 II DB36/T 1527—2021 常见作物寄生线虫形态学鉴定方法 1 范围 本文件规定了常见作物上包括垫刃目、滑刃目、矛线目、三矛目等 4 个目 20 属寄生线虫有关的样 品采集与分离、形态学鉴定方法和结果判定。 本文件适用于常见作物的 4 个目 20 属寄生线虫形态学鉴定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 主要设备 生物显微镜、离心机、解剖镜。 5 样品采集与分离 5.1 采集 主要检查植物材料地上部分叶片颜色、株高、茎粗等生长指标是否异常，根部是否有根结、褐化或 发黑等症状，收集上述可疑材料及根际土壤带回实验室检验。具体采样特征见附录 A。 5.2 分离 5.2.1 要求 将植物材料轻轻冲洗干净后，于吸水纸上吸掉表面水后，然后用刀片切成约0.5 mm厚的薄片用贝 尔曼漏斗法或浅盘法分离线虫。将分离获得的线虫液通过沉淀或离心浓缩后，制成临时玻片，于10×40 倍下进行镜检，观察线虫的形态学特征。 5.2.2 贝尔曼漏斗法 在口径为 20 cm 的漏斗末端接一段橡皮管，在橡皮管末端用弹簧夹夹紧，在漏斗上方放置一层纱布 和一层线虫滤纸，将土样或者切碎的植物材料均匀铺在滤纸上，缓慢加水至浸没样品，室温下放置 48 h 后，打开夹子，收集橡皮管里的水样，于解剖镜下观察是否有线虫。若有线虫，将水样摇匀后，吸取 100 μL 或 200 μL 线虫液，制成临时玻片，进行镜检鉴定。 5.2.3 浅盘法 1 DB36/T 1527—2021 把网眼筐套放在塑料盆中，在网眼筐里放入一层纱布和一张等大的清风牌双层面巾纸。将土样或者 切碎的植物材料轻轻倒在面巾纸上平摊开， 用量杯轻轻地沿塑料盆壁往盆里加水直至水没过土面 2 mm。 静置 48 h 后，轻轻取出带土的网眼盆，把塑料盆中的水样(即线虫悬浮液)倒入 500 mL 量杯中，再用少 量(约 20 mL)清水冲洗塑料盆，重复清洗 2 次，冲洗液继续倒入 500 mL 量杯中。量杯中的线虫液静置 3 h 后，用橡皮管吸去上清液，留下约 100 mL，摇匀后倒入平底管中，并用 5 mL 清水冲洗，重复清洗 2 次量杯，将附着在杯壁、杯底的线虫冲洗入平底管中。静置 3 h，用橡皮管轻轻吸取上层水留下约 20 mL， 摇匀后倒入有刻度的试管中，再用少量清水沖洗平底管 2 次，冲洗液继续倒入有刻度试管中。静置 3 h 或离心去上清后摇匀后制成临时玻片，进行镜检鉴定。 6 鉴定方法 6.1 鉴定依据 根据不同目、科、属线虫体形、唇区、口针、口针基部球、食道类型、背食道腺开口位置、中食道 球大小及形状、侧尾腺口形状、生殖器官位置及特征、尾部形状及特征等主要形态特征进行鉴定。 6.2 鉴定特征 垫刃目包括15个属，分别为垫刃线虫属(Tylenchus)、茎线虫属(Ditylenchus)、粒线虫属（Anguina）、 矮化线虫属(Tylenchorhynchus)、短体线虫属(Tylenchorhynchus)、潜根线虫属(Hirschmanniella)、穿孔线 虫属(Radopholus)、盾线虫属 (Scutellonema)、盘旋线虫属(Rotylenchus)、螺旋线虫属 (Helicotylenchus)、 肾形线虫属 (Rotylenchulus)、孢囊线虫属 (异皮属 Heterodera)、根结线虫属 (Meloidogyne)、环线虫属 (Criconema)、针线虫属 (Paratylenchus)； 滑刃目包括2个属，分别为真滑刃线虫属 (Aphelenchus)和滑刃线虫属 (Aphelenchoides)； 矛线目包括2个属，分别为剑线虫属 (Xiphinema)和长针线虫属 (Longidorus)； 三矛目包括1个属，为毛刺线虫属 (Trichodorus)。 以上20属线虫具体形态学特征和形态特征图分别详见附录B和附录C。 7 结果判定 依据附录 B 和附录 C 将测试线虫判定到属。 2 DB36/T 1527—2021 AA 附 录 A （资料性） 20 属常见作物寄生线虫的主要寄主、常见种及为害症状 A.1 垫刃线虫属 (Tylenchus) 这类线虫通常分布于许多植物的根系周围，有些也存在于苔藓根际，其寄生性尚不清楚。 常见种：戴维恩垫刃线虫（T. davainei） 、优美垫刃线虫（T. elegansde） 、弓形垫刃线虫（T. arcuatus） 和丽塔垫刃线虫(T. rotae)。 A.2 茎线虫属 (Ditylenchus) 茎线虫既可寄生植物地上部分，也可寄生地下部分，主要寄主有甘薯、马铃薯、起绒草、水稻等。 常见种：腐烂茎线虫（甘薯茎线虫 D. destructor） 。 为害症状：主要为害块根、茎蔓及秧苗。秧苗根部受害，在表皮上生有褐色晕斑，秧苗发育不良、 矮小发黄；茎部症状多在髓部，初为白色，后变为褐色干腐状；块根症状有糠心型、糠皮型和混合型， 糠心型，由染病茎蔓中的线虫向下侵入薯块，病薯外表与健康甘薯无异，但薯块内部全变成褐白相间的 干腐；糠皮型，线虫自土中直接侵人薯块，使内部组织变褐发软，呈块状褐斑或小型龟裂；严重发病时， 两种症状可以混合发生，呈混合型。 A.3 粒线虫属 (Anguina) 本属线虫为植物种子和茎部的代表寄生物，主要侵染禾本科单子叶植物。 常见种：小麦粒线虫 （A. tritici）。 为害症状：病株叶片扭曲，抽穗增多，茎基部变粗，甚至使植物矮化与弯曲以致被害种粒形成虫瘿 等。 A.4 矮化线虫属 (Tylenchorhynchus) 矮化线虫寄主范围很广，主要包括烟草、棉花、燕麦、玉米、甘蔗、水稻、大豆和花生等重要经济 作物。 常见种有：饰环矮化线虫（T. annulatus） 、克莱顿矮化线虫（T. claytoni） 、甘蓝矮化线虫（T. brassicae）、 裸露矮化线虫（T. nudus） 。 为害症状：主要取食于根毛细胞、表皮细胞，通常不会引起明显的地上部症状，受害植物根系生长 受到抑制而发育不良，株稍停止生长，植株矮化。 A.5 短体线虫属 (根腐线虫属 Pratylenchus) 短体线虫寄主范围很广，重要寄主有：咖啡、茶、香蕉、烟草、山药、樱桃、苹果、马铃薯、甘薯、 西瓜、葡萄、柑桔、大豆、豌豆、绿豆及各种蔬菜等。 常见种包括：短尾短体线虫（P. brachyurus） 、咖啡短体线虫（P. coffeae） 、薯蓣短体线虫（P. dioscorea） 3 DB36/T 1527—2021 e、卢氏短体线虫（P. loosi）、穿刺短体线虫（P. penetrans） 、落选短体线虫（P. neglectus） 、斯克里布纳 短体线虫（P. scribneri） 、索恩短体线虫（P. thornei） 、伤残短体线虫（P. vulnus） 、玉米短体线虫（P. zeae） 。 为害症状：本属线虫主要在根部皮层取食，引起根系不发达，根部组织变褐腐烂、坏死。由于其对 根部造成伤口，往往与细菌、真菌导致复合侵染。 A.6 潜根线虫属 (Hirschmanniella) 潜根线虫属具有比较广泛的寄主，最主要的寄主为水稻，也从芋、甘蔗、棉花、番茄、玉米、小麦 等作物根部发现，野生寄主以禾本科和莎草科最重要。 常见种包括：水稻潜根线虫（H. oryzae） 。 为害症状：受害水稻生长迟缓、植株矮小黄化、分蘖减少、抽穗和开花推迟，被侵染根变黄