ICS 65.020.20 B 38 DB45 广 西 壮 族 自 治 区 地 方 标 准 DB 45/T 1859—2018 红腺忍冬组培快繁技术规程 Tissue culture and rapid propagation techniques regulation of Lonicera hypoglauca Miq． 2018 - 10 - 20 发布 广西壮族自治区质量技术监督局 2018 - 11 - 20 实施 发 布 — DB45/T 1859 2018 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 组培快繁 .......................................................................... 1 4 移栽和出圃 ........................................................................ 2 5 包装与运输 ........................................................................ 3 6 生产档案 .......................................................................... 3 附录 A（规范性附录）培养基配方 ........................................................ 5 I — DB45/T 1859 2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由广西壮族自治区卫生和计划生育委员会提出。 本标准由广西卫生标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：广西壮族自治区药用植物园。 本标准主要起草人：师凤华、谭木秀、蒲祖宁、郭晓云、李翠。 III — DB45/T 1859 2018 红腺忍冬组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了红腺忍冬（Lonicera hypoglauca Miq．）组培快繁、移栽和出圃、包装与运输、生产 档案等的要求。 本标准适用于广西境内红腺忍冬的组培快繁育苗。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 393 绿色食品 农药使用准则 国家药品监督管理局第32 号令（2002 年） 中药材生产质量管理规范（试行） 3 组培快繁 3.1 外植体来源 选择生长健壮、长势一致、无病虫危害的具4～6片真叶的红腺忍冬种子实生苗植株为外植体。 3.2 外植体取材及记录 3.2.1 取材时间 宜于连续晴天2 d以上，上午9:00～11:00取材。 3.2.2 取材部位 选取具4～6片真叶的幼嫩种子实生苗无根植株。 3.2.3 取材记录 对每份材料宜记录采集号、采集地点、生长环境、采集时间、采集人等信息，建立外植体采集信息 档案。红腺忍冬采集记录表见表1。 表1 红腺忍冬取材记录表 序号 采集号 采集地点 生长环境 采集时间 采集人 备注 1 — DB45/T 1859 2018 3.3 外植体诱导 3.3.1 预处理 用软毛刷于 0.05％洗洁精水中轻轻刷洗外植体表面灰尘杂质后，于自来水下流水冲洗 30 min，沥 干材料表面水分，放入灭菌玻璃瓶内，材料所占空间控制在容积的 1/3 之内。 3.3.2 灭菌 于超净工作台上，将外植体先用 75%酒精浸泡 30 s，无菌水冲洗 3 次，再于 0.1％HgCl （加 2～3 滴吐温-20）中灭菌 5 min后，无菌水冲洗 4～6 次，取无菌滤纸吸干外植体的表面水分。 2 3.3.3 诱导培养 于超净工作台上剪去已灭菌的外植体旧切口，以芽端朝上插入外植体诱导培养基中，培养基按附录 A 中 A.1 的要求配制；剪除碰触培养基的叶片部分，每瓶接种外植体 2～3 个（此为 220 mL 规格的组培瓶接 种量），培养 30 d～50 d。 3.4 继代培养 将生长健壮的无菌组培芽苗，分别剪取 1.5 cm～2.0 cm长的顶芽或带 2～3 个腋芽的茎段插入继代 培养基中，培养基按附录A中A.2 的要求配制，进行继代增殖培养，继代周期为 30 d～50 d。 3.5 生根培养 将生长健壮的无菌组培芽苗，分别剪取3.0 cm～5.0 cm长的顶芽或带2～3个腋芽的茎段插入生根培 养基中，培养基按附录A中A.3的要求配制，进行生根培养，培养30 d～50 d。 3.6 培养条件 培养室温度为（25±3）℃，相对湿度为50％～75％，每天光照时间为12 h，光照强度为2 000 lx～ 3 000 lx。 4 移栽和出圃 4.1 苗床选址 选择背风向阳、排灌良好的地方搭建育苗大棚，配备60％～70％遮阳网和防虫网。 4.2 苗床构建及消毒 苗床宜宽1 m～1.1 m，长10 m～15 m。将泥碳土、肥沃苗土、珍珠岩按比例为2:1:1搅拌均匀后作为 基质，并淋施0.5 g/L的多菌灵和0.8 g/L的高锰酸钾混合液消毒，15 d～20 d后将基质装进容积为300 mL 的塑料营养杯，并整齐摆放于苗床上备用。 4.3 炼苗 将符合炼苗条件（根数≥3条、根长≥2 cm、叶片数≥5张的健壮植株）的生根瓶苗，于室内常温下 封盖2 d～3 d之后打开瓶盖，加入高于培养基表面0.4 cm～0.5 cm的清水，每天早、中、晚对苗各进行1 次喷雾保湿，炼苗5 d～7 d。 2 — DB45/T 1859 2018 4.4 洗苗 从培养瓶中取出经过炼苗驯化的组培苗，用清水轻轻漂洗干净。 4.5 移栽 将洗好的组培苗移栽至苗床上的杯装基质中，移栽深度以基质盖过组培苗根部为宜，栽苗后对基质 稍压实，以苗不倒的程度即可，应及时浇透定根水，并标记材料名称及移栽日期。 4.6 日常管理 4.6.1 环境条件 移栽大棚温度为20℃～30℃，相对湿度为80％～95％，自然光照强度为60％～70％；初期避风培育 种苗，待苗根系稳扎于移栽基质中（移栽后4～5周），应适当通风育苗。 4.6.2 水肥管理 移栽后，应保持培养基质湿润；移栽4周后至出圃的生长期内，每周喷施0.1%的复合肥1次。移栽6 周时统计组培苗成活率。 4.6.3 主要病虫害防治 移栽后，根据病虫害实际情况，对病虫害状况进行针对性防治。药物使用应符合NY/T 393的规定。 4.7 出圃苗质量要求 幼苗长出5片以上新叶、生长健壮、苗高≥20 cm、根系发达、植株完整且无病虫害。 5 包装与运输 5.1 包装 出圃苗按苗高整齐分装入规格统一、高出苗顶面5 cm以上的竹筐或塑料筐内，及时喷水，在装载物 外表面贴上标签，标注品种名称、数量、产地、种苗经营许可证编号、生产单位名称、地址、联系人等。 5.2 运输 苗应有序叠放，不得过度挤压和随意堆叠；长途运输应有防风、防晒、防雨措施；运输过程中温度 应保持在10℃～25℃，以免高温烧苗。 6 生产档案 应符合国家药品监督管理局第32号令（2002 年）中第九章的规定，并对组培快繁育苗技术的各环 节所采取的措施进行详细记录，建立生产档案，记录表见表2。 3 — DB45/T 1859 2018 表2 红腺忍冬组培快繁育苗记录表 日期 序号/ 数量 批次 （株） 炼 苗 移栽 施肥 出圃 种类 施用 时间 病虫害防治 病虫 浓度 害种 类 A 4 方法 用药 施用 名称 时间 浓度 施药 方法 负责 人员 DEF BA — DB45/T 1859 2018 附 录 A （规范性附录） 培养基配方 A.1 诱导培养基 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+6-BA 2.0 mg/L+ GA3 0.3 mg/L（pH 5.8～pH 6.0）。 A.2 继代培养基 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.02 mg/L+GA3 1.5 mg/L（pH 5.8～pH 6.0）。 A.3 生根培养基 。 1/2 MS+蔗糖 30 g/L+琼脂 6 g/L+NAA 0.2 mg/L（pH 5.8～pH 6.0） C 5 中华人民共和国广西地方标准 红腺忍冬组培快繁技术规程 DB45/T 1859―2018 广西壮族自治区质量技术监督局统一印刷 版权专有 侵权必究