ICS 67.040 C 53 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 2407—2015 大米中氯虫苯甲酰胺残留量的测定 高效液相色谱法 Determination of chlorantraniliprole residue in rice by HPLC 文稿版次选择 2015 - 07 - 14 发布 安徽省质量技术监督局 2015 - 08 - 14 实施 发 布 DB34/T 2407—2015 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业部农产品质量安全风 险评估实验室（合肥）、安徽科威农药重金属残留检测中心。 本标准起草人：段劲生、高同春、王梅、孙明娜、董旭、褚玥、杨通、肖青青。 I DB34/T 2407—2015 大米中氯虫苯甲酰胺残留量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了大米中氯虫苯甲酰胺残留量的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于大米中氯虫苯甲酰胺残留量的测定。 本标准的方法检出限为 0.01 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6379.1 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分:总则与定义 GB/T 6379.2 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方法重复性与 再现性的基本方法 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样用乙腈和盐酸混合溶液提取后，经中性氧化铝柱层析净化，用高效液相色谱紫外检测器检测， 外标法定量。 4 试剂与材料 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 4.9 4.10 4.11 4.12 4.13 水为 GB/T 6682 规定的一级水。 乙腈。 丙酮。 石油醚：60～90℃。 乙腈：色谱纯。 浓盐酸。 氯化钠。 无水硫酸钠：用前在 650℃下灼烧 4 h 后备用。 中性氧化铝：100～200 目，用前 130℃处理 4 h，加水 5％减活，备用。 盐酸溶液：2.0 mol/L。 氯虫苯甲酰胺标准品：纯度 ≥99％。 0.45 μm 微孔过滤膜 标准溶液 ——氯虫苯甲酰胺标准储备液:准确称取氯虫苯甲酰胺 0.0100 g，置于 10.0 mL 容量瓶中，乙腈 1 DB34/T 2407—2015 溶解并定容至刻度，配置成浓度为 1000 mg/L 储备液，于 0～5℃下避光保存。 ——氯虫苯甲酰胺标准工作液：取 1000μg/mL 氯虫苯甲酰胺储备液，用乙腈稀释，配成质量浓度 分别为 8.0 mg/L 、4.0 mg/L、2.0 mg/L 、1.0mg/L、0.5 mg/L 和 0.25 mg/L 的标准工作溶 液，待用。标准工作液需现配现用。 5 主要仪器和设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 6 高效液相色谱仪：配紫外检测器。 旋转蒸发仪。 真空泵。 水浴恒温振荡器。 氮吹仪 电子天平：感量 0.1 g 和 0.1 mg。 分析步骤 6.1 样品的采集、贮存及试样制备方法 将不少于 1000 g 大米（已脱壳）混匀，四分法取样，放入食品加工机粉碎，过 20 目筛，制成试 样，放入试样瓶中密封，做上标记，并置于 -20℃条件下保存，待测。 6.2 试样处理 6.2.1 提取 准确称取 25 g（精确至 0.1 g）制备好的试样于锥形瓶中，向锥形瓶中加 10 mL 盐酸溶液和 20 mL 水浸泡 20 min，再加 80 mL 乙腈（4.1）浸泡过夜，振荡提取 1 h，过滤，残渣用 40 mL 乙腈（4.1） 分两次洗涤，合并滤液于分液漏斗中，加 5.0 g 氯化钠，振摇 3 min，静置分层，弃去下层水相，乙 腈相经无水硫酸钠（4.7）干燥后，用旋转蒸发仪于 35℃水浴下浓缩至近干，待柱层析净化。 6.2.2 净化 在玻璃层析柱中依次装填 2.0 cm 高无水硫酸钠、5.0 g 中性氧化铝（4.8）、2.0 cm 高无水硫酸 钠，层析柱先用 20 mL 石油醚+丙酮（1+1，体积比）预淋洗，弃去，然后转移样品液至柱上，用 50 mL 石油醚+丙酮（1+1，体积比）洗脱，重复一次，收集洗脱液，用旋转蒸发仪于 35℃水浴下浓缩至近干， 氮吹仪用氮气吹干，乙腈（4.4）定容至 2.0 mL，过 0.45μm 滤膜，供高效液相色谱仪测定。 6.3 测定 6.3.1 高效液相色谱条件 a) b) c) d) e) f) 2 色谱柱：C18 柱， 5 μm，250 mm× 4.6 mm（内径）或相当者； 柱箱温度：35℃； 流动相：乙腈+水（1+1，体积比）； 流速：0.8 mL/min； 检测波长：220 nm； 进样体积：10 μL。 DB34/T 2407—2015 6.3.2 液相色谱测定 取氯虫本甲酰胺标准工作溶液系列（4.12.2）及试样溶液各 10μL，注入高效液相色谱仪进行分析， 用外标法定量。 6.4 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行测定。 6.5 空白实验 除不称取试样外，均按上述步骤测定。 7 结果计算 试样中的氯虫本甲酰胺含量按公式（1）计算： R C V m .................................... (1) 式中： R —— C —— V —— m —— 样品中氯虫本甲酰胺残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准曲线上得到的待测样液中氯虫本甲酰胺的浓度，单位为毫克每升（mg/L)； 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 称取的试样量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值。 8 方法的准确度和精密度 8.1 准确度 本方法在 0.01 mg/kg～1.0 mg/kg 之间添加浓度的回收率在 80％～110％之间。 8.2 精密度 本标准精密度数据是按照 GB/T 6379.1 和 GB/T 6379.2 的规定确定的，获得重复性和再现性的值 是以 95％的可信度来计算，本标准方法的精密度数据参加附录B。 9 高效液相色谱参考图 见附录A。 3 DB34/T 2407—2015 AA 附 录 A （资料性附录） 氯虫苯甲酰胺标准溶液色谱图（1.0 mg/L） 图A.1 氯虫苯甲酰胺标准溶液色谱图（1.0 mg/L） 4 DB34/T 2407—2015 BB 附 录 B （资料性附录） 氯虫苯甲酰胺精密度数据表 表B.1 氯虫苯甲酰胺精密度数据表 名称 氯虫苯甲酰胺 含量 重复性限 再现性限 含量 重复性限 再现性限 （mg/kg） r R （mg/kg） r R 0.01 0.0005 0.0016 0.5 0.0198 0.0380 _________________________________ 5