ICS  67.040 C 53 DB34 安 徽 省 地 方 标 准 DB 34/T 2825—2017 畜、禽产品中苯海拉明残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of diphenhydramine residues in livestock and poultry products-LC-MS/MS method 文稿版次选择 2017 - 03 - 30 发布 安徽省质量技术监督局 2017 - 04 - 30 实施 发 布 DB34/T 2825—2017 前    言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。 本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、安徽国泰众信检测技术有限公司。 本标准主要起草人：吕亚宁、胡艳云、宋伟、韩芳、罗继军、丁磊、周典兵、沈贵兰、郑平、盛旋、 陈洪周。 I DB34/T 2825—2017 畜、禽产品中苯海拉明残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了畜、禽产品中苯海拉明残留量的液相色谱串联质谱测定方法。 本标准适用于猪肉、牛肉和鸡肉中苯海拉明残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 方法原理 试样经 10％甲醇水溶液超声提取后，经 C18 固相萃取柱净化，微孔滤膜过滤后进样，经液相色谱 电喷雾串联质谱仪定性和定量检测，在一定浓度范围内，待测化合物含量与峰面积成正比，与标准系列 比较定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 甲酸：色谱纯。 4.4 乙腈：色谱纯。 4.5 10％甲醇水溶液：量取 10 mL 甲醇(4.2)与 90 mL 水混合。 4.6 苯海拉明标准品：纯度大于等于 99％。 4.7 苯海拉明标准储备液(1000 μg/mL)：准确称取适量标准品，用 10％甲醇水溶液溶解并配成浓度为 1000 μg/mL。 4.8 苯海拉明标准工作溶液：分别吸取苯海拉明标准储备液（4.7），用流动相溶液[乙腈：0.05％甲 酸水溶液=40：60]配制标准系列浓度依次为： 1 μg/L、5 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L。 5 5.1 5.2 5.3 5.4 仪器和设备 液相色谱串联四级杆质谱仪或相当者，配电喷雾离子源（ESI）。 粉碎设备：组织捣碎机。 电子天平：精确至 0.0001 g。 高速冷冻离心机。 1 DB34/T 2825—2017 5.5 固相萃取真空装置。 5.6 均质器。 5.7 Bond Elut C18 固相萃取柱或相当者：500 mg，6 mL。使用前分别用 5 mL 甲醇和 5 mL 水预处理， 保持柱体湿润。 5.8 微孔滤膜：水系，0.22 m。 6 分析步骤 6.1 试样制备与保存 取有代表性样品约 500 g，将其切碎后，用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装入洁净的称样 容器内，密封并标明标记。 试样于 -18℃冰箱内密封保存。 6.2 试样提取与净化 称取有代表性的粉碎肉样约 5.0 g（精确到 1 mg）于 100 mL 具塞塑料离心管中，加甲醇水溶液 （4.4）20 mL，于均质器上提取 1 min，以 8000 r/min 于 4℃低温下离心 10 min，将上清液经滤纸 过滤倾入至 50 mL 容量瓶，再按上述条件重复提取一次，合并上清液，定容至 50 mL。 吸取上述提取液 10 mL，以不超过 1 mL/min 的流速通过 C18 固相萃取柱（5.7），收集滤液过微 孔滤膜后供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.3 液相色谱-质谱/质谱参考条件 6.3.1 色谱柱：Ecclipse Plus-C18（2.1 mm *50 mm，1.8 μm）或相当者。 6.3.2 流动相：乙腈：0.05％甲酸水溶液=40:60。 6.3.3 流速：0.3 mL/min。 6.3.4 柱温：30℃。 6.3.5 进样体积：5 μL。 6.3.6 离子模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+）。 6.3.7 质谱扫描方式：多反应监测（MRM），见表 1。 6.3.8 电喷雾离子源参考条件： ——喷雾电压：4000 V； ——雾化器流速：6 L/min； ——气帘气流速：12 L/min； ——离子源温度：350℃。 表1 化合物 苯海拉明 6.4 2 定量测定 苯海拉明的主要参考质谱参数 母离子 子离子 驻留时间 毛细管出口电压 碰撞电压 （m/z） （m/z） /ms （V） （V） 167.1 200 60 6 165.1 200 60 46 256 DB34/T 2825—2017 在上述工作条件下，将标准使用液和样品溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，以标准溶液中苯海拉 明浓度为横坐标，绘制标准曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中苯海拉明的响应值均应 在仪器测定的线性范围内。 在上诉条件下，苯海拉明参考保留时间为 0.58 min，其多反应监测色谱图见附录A。 6.5 定性确证 在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液中对应的保留时间偏差在 ±2.5％ 之内；且在扣除背景后的试样谱图中，所选择的离子对均出现，同时苯海拉明定性离子的相对丰度与标 准工作溶液中定性离子的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2 规定的范围时，则可确定为样品中存 在苯海拉明残留。 表2 6.6 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度 ＞50％ ＞20％至 50％ ＞10％至 20％ ≤10％ 允许的相对偏差 ±20％ ±25％ ±30％ ±50％ 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 7 结果计算 测定结果按公式（1）计算： X  c  V  N  1000 m ................................. (1) 式中： X —— 试样中分析物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c —— 试样样液中分析物的浓度，单位为微克每升（μg/L）； V —— 样液的定容体积，单位为升（L）； N —— 稀释倍数； m —— 试样的质量，单位为克（g）。 注：计算结果应扣除空白值，结果保留三位有效数字。 8 测定低限和回收率 8.1 测定低限 本标准的测定低限为：0.01 mg/kg。 8.2 回收率 本方法在 0.01 mg/kg～1 mg/kg 间添加浓度的回收率在 72％～103％之间。 3 DB34/T 2825—2017 AA 附 录 A （资料性附录） 苯海拉明标准溶液的多反应监测（MRM）色谱图 图A.1 苯海拉明标准溶液的多反应监测色谱图（1 μg/L） _________________________________ 4