I C S 备案 号： 10218- 2000 青 海 省 地 方 标 准 D B 63 D B 63 D B 63 D B 63 D B 6 3 / T 3 5 8 — 1 9 9 9 青海省马铃薯脱毒种薯生产技术 操作规程 1 9 9 9 - 1 2 - 2 4 发布 2 0 0 0 - 0 3 - 0 1 实施 青 海 省 质 量 技 术 监 督 局 发 布 D B 63/ T 358 — 1999 I 前 言 马铃 薯是 我省 的主 要农 作物 ， 利 用 块茎 做种 ， 在 繁 殖过 程中 容易 感病 毒， 导 致 种薯 退化 ， 甚 至 丧 失 种用 价值 。 为 了 保证 种薯 质量 ， 充 分 发挥 脱毒 种薯 的增 产作 用和 延长 使用 年限 ， 特 制 定脱 毒种 薯生 产 技 术操 作规 程， 供有 关单 位执 行使 用。 本规 程为 《 马 铃薯 脱毒 种薯 技术 综合 标准 》 的 一 个单 项标 准， 与 马 铃薯 脱毒 种薯 病毒 检测 、 马 铃 薯 脱毒 种薯 分级 标准 相配 套。 本规 程由 青海 省农 业技 术推 广总 站提 出并 归口 。 本规 程起 草单 位： 青海 省农 业技 术推 广总 站、 青海 省农 林科 学院 生物 中心 。 本规 程自 2000 年 3 月 1 日起 实施 。 本规 程主 要起 草人 ：王 祖训 、 王 维 、 杨永 智 、 张云 杰 、 保国 恩。 D B 63/ T 358 — 1999 1 青海省马铃薯脱毒种薯生产技术 操作规程 1 范围 本规 程为 青海 省马 铃薯 脱毒 种薯 生产 技术 操作 规程 。 本规 程适 用于 青海 省马 铃薯 脱毒 种薯 的生 产技 术。 本规 程可 作为 青海 省各 级农 业科 研、 教学 、农 业技 术推 广、 种子 部门 、国 有良 （原 ） 种场 和生 产 单位 繁育 马铃 薯脱 毒种 薯， 以及 农业 教学 、农 业科 技培 训。 2 规范 性引 用文 件 下列 文件 中的 条款 通过 本标 准的 引用 而成 为本 标准 的条 款。 凡 是 注日 期的 引用 文件 ， 其 随 后所 有 的 修改 单 （ 不 包括 勘误 的内 容） 或 修 订版 均不 适用 于本 标准 ， 然 而 ， 鼓 励 根据 本标 准达 成协 议的 各方 研 究 是否 可使 用这 些文 件的 最新 版本 。凡 是不 注日 期的 引用 文件 ，其 最新 版本 适用 于本 标准 。 GB3243 — 82 马铃 薯种 薯生 产技 术操 作规 程 DB/T340 — 1999 青海 省马 铃薯 脱毒 种薯 病毒 检测 标准 3 定义 本规 程采 用下 列定 义。 3.1 ＰＶ Ｘ 即马 铃薯 Ｘ病 毒， 也称 马铃 薯普 通花 叶病 毒， 主要 症状 为叶 脉间 表现 花叶 。 3.2 ＰＶ Ｙ 即马 铃薯 Ｙ病 毒， 也称 马铃 薯重 花叶 病毒 ，主 要症 状为 轻花 叶或 茎粗 缩， 严重 时坏 死。 3.3 ＰＶ Ｓ 即马 铃薯 Ｓ病 毒， 也称 马铃 薯潜 隐性 花叶 病毒 ，表 现症 状为 叶脉 深陷 粗缩 。 3.4 ＰＬ ＲＶ 即马 铃薯 卷叶 病毒 ， 表 现 症状 为叶 缘向 上卷 曲形 成管 状， 病 叶 小， 叶 质 硬脆 ， 病 株 呈扫 帚状 ， 初 侵 染叶 顶呈 浅黄 白色 ，有 些品 种呈 紫或 红色 。 3.5 ＰＳ ＴＶ 即马 铃薯 纺锤 形块 茎类 病毒 ，茎 杆上 表现 症状 轻微 ，块 茎呈 纺锤 形， 常呈 龟裂 畸形 。 3.6 脱毒 苗 指马 铃薯 通过 茎尖 剥离 、 分 生 组织 培养 脱去 ＰＶ Ｘ 、 ＰＶ Ｙ 、 ＰＶ Ｓ 、 ＰＬ ＲＶ 和 ＰＳ ＴＶ 等病 毒 的试 管苗 。 3.7 脱毒 种薯 利用 脱毒 苗， 通 过 世代 扩大 繁殖 ， 生 产出 来的 种薯 ， 即 原原 种 （ M 0 ） 、 原 种 一代 （ M 1 ）、 原种 二 代 （ M 2 ）等 。 3.8 微型 薯 利用 脱毒 苗栽 植、 茎扦 插， 在温 室或 防虫 网棚 内假 植槽 上高 密度 繁育 的， 块茎 粒重 量为 1 ｇ — 20 ｇ 的种 薯。 3.9 脱毒 原原 种（ M 0 ） 指用 微型 薯在 温室 或防 虫网 棚内 栽培 生产 的无 病毒 种薯 。 D B 63/ T 358 — 1999 2 3.10 原种 一代 （ M 1 ） 指用 M 0 在具 备一 定隔 离条 件的 原种 生产 场生 产的 合格 种薯 。 3.11 原种 二代 （ M 2 ） 用 M 1 在具 备一 定的 隔离 条件 的原 种场 生产 的合 格种 薯。 3.12 马铃 薯脱 毒种 薯生 产繁 育体 系 从培育脱毒苗开始，逐世代繁育原原种（ M 0 ） → 原种一代（ M 1 ） → 原种二代（ M 2 ） → 原种三代 （ M 3 ） → 原种 四代 （ M 4 ）的 梯级 繁种 体系 。 4 脱毒 种薯 生产 技术 4.1 脱毒 苗 4.1.1 培养 基 用于 马铃 薯组 织培 养的 培养 基种 类较 多， 不 同 马铃 薯品 种及 不同 条件 可采 用不 同种 类的 培养 基。 最 常用 培养 基有 “ ＭＡ ” 培养 基、 “ ＭＳ ” 培养 基、 怀 特 氏培 养基 、 植 试 培养 基、 农 试 培养 基等 。 一 般 情 况下 ，茎 尖初 培养 选用 附加 生长 调节 剂 “ ＭＳ ” 培养 基， 继代 培养 选用 不带 有机 成分 的 “ ＭＳ ” 培养 基， 快繁 采用 不加 任何 生长 调节 剂和 有机 元素 的 “ ＭＳ ” 培养 基。 4.1.2 茎尖 剥离 4.1.2.1 选择 适宜 当地 种植 的已 经省 级农 作物 品种 审定 委员 会审 定通 过的 品种 ，选 出若 干具 有原 品种 特征 特性 的健 康种 薯（ 块茎 ）。 4.1.2.2 对中 选的 块茎 重量 100 ｇ — 150 ｇ的 壮龄 薯，在 2 ℃— 6 ℃ 和连 续光 照下 钝化 纺锤 块茎 病毒 60 天， 置于 36.5 ℃— 37.5 ℃ 温箱 中钝 化卷 叶病毒 30 天， 然后 在室内 13 ℃— 18 ℃ 条件 下催 芽。 4.1.2.3 经过 处理 的块 茎， 待幼 芽长至 4 ｃｍ — 5 ｃｍ ，幼 叶未 展时 ，剪取 2 ｃｍ 幼芽 进行 消毒 ，然 后 在无 菌室 内超 净工 作台 上剥 取长 0.2 ｍｍ — 0.5 ｍｍ 、带 1 个 — 2 个叶 原基 的生 长锥 。 4.1.3 分生 组织 培养 将切 下的 茎尖 分生 组织 立即 接种 在试 管内 的Ｍ Ｓ培 养基 上， 每个 试管 接 1 个茎 尖， 接种 后用 棉球 或 纱布 球塞 好管 口， 管 口外 并用 牛皮 纸包 扎、 封 严、 并 编号 、 记 录 。 茎 尖 组织 置于 20 ℃— 25 ℃ 、 相 对湿 度 70 ％、 光照 强度 3000lux — 5000lux 、每 天光 照 16 小时 条件 下培 养（ 光源 为日 光灯 ，并 配以 散射 阳光 更佳 ）。 两周 后， 试管 内生 长点 明显 增大 变绿 ，两 个月 后， 即可 长成 高约 3cm 的小 植株 。此 时， 将小 植 株转 移到 不带 有机 成分 的Ｍ Ｓ培 养基 上， 待其 长到 5 片 — 8 片小 叶时 ，进 行病 毒检 测。 4.1.4 脱毒 苗切 段快 繁 通过 检测 ，不 带任 何病 毒、 类病 毒的 组培 苗， 即脱 毒苗 ，切 段快 繁。 当脱 毒苗 长至 7 片 — 8 片 叶 时 ， 在无 菌条 件下 将试 管中 的脱 毒苗 取出 ， 剪 成 每侧 段都 带有 一个 叶片 的小 段， 然 后 把切 段平 放在 不加 任 何 生长 调节 剂和 有机 元素 的培 养基 三角 瓶中 ， 200ml 三角 瓶可 放 40 个切 段， 在 5 ℃— 22 ℃ 、 光 照 充分 的条 件 下， 一个 月可 获得 7 片 — 8 片叶 的植 株， 可供 进一 步切 段繁 殖。 扩繁 脱毒 苗进 行病 毒检 测。 4.2 微型 薯 4.2.1 繁育 条件 微型 薯必 须在 封闭 温室 内或 防虫 网棚 内生 产。 4.2.2 脱毒 苗壮 苗培 养 扩繁的脱毒苗长到高 3cm — 4cm 、苗龄 3 片 — 4 片叶时开始炼苗，炼苗最适温室 20 ℃— 25 ℃ ，最低 10 ℃ ， 最 高 35 ℃ ， 相 对 湿度 80 ％以 上。 炼 苗时 间在 自然 光照 下 5 天 — 7 天。 炼 苗标 准是 叶片 宽大 、 深 绿 、 茎 杆粗 壮。 4.2.3 苗床 定植 将经 过壮 苗培 养的 脱毒 苗移 栽到 以蛭 石粉 或珍 珠岩 或细 砂为 培养 基质 的培 养盘 上， 每平 方米 栽 400 株 — 500 株， 缓苗 3 天 — 5 天， 最适 温度 20 ℃— 25 ℃ 。相 对湿 度 85 ％以 上。 4.2.4 采收